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層析分離方法介紹

概    述 
■ 層析法――是一種使不同分子相互分離的過程,當一混合樣品被導入一固定相的支持體
中,而另一流體(移動相)通過時,由于樣品各組分與固定相和移動相相互作用的大小不同,使各組分通過固定相支持體的速率不同而得分離。 
層析法的特點:能分離一系列結構較為相似的成分,以達到一般分離方法難以達到的
目的。 
■ 層析常見種類及用途: 
a.柱層析――分離量較大,主要用于分離制備; 
b.薄層層析――主要用于分析鑒定,也可用于半微量制備。 c.紙層析――主要用于分析鑒定,也可用于半微量制備。 
■ 層析法按分離原理大體上又可以分為 
(1) 吸附層析(利用吸附能力的差別進行分離),常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等; (2) 分配層析(利用在二種不互溶的溶劑中分配比不同進行分離),常用的支持劑為硅膠、硅藻土、纖維粉等,反相硅膠(鍵合硅膠)、液滴逆流層析則是分配層析與逆流分溶的發(fā)展; 
(3) 離子交換層析(利用離子解離強度不同進行分離),常用的離子交換樹脂有強酸性(磺酸型)、強堿性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱堿性(三級胺型); 
(4) 電泳(利用電流通過時,離子趨電性不同進行分離),常用的有紙電泳、瓊脂電泳、凝膠電泳。 
(5) 其他有氣體層析、凝膠層析、親和層析等, 
■ 層析方法的選擇: 
(1) 非極性的成分常選擇氧化鋁或硅膠吸附層析; (2) 極性較大則采用分配層析或弱吸附劑吸附層析; 
(3) 酸性、兩性成分可用離子交換層析,有時也可用吸附層析及分配層析。 
■ 各類化合物適宜的層析方法: 
a. 一般生物堿的分離可用硅膠或氧化鋁層析,對極性較高的生物堿也可用分配層析,而對季胺型水溶性生物堿也可用分配層析或離子交換層析。 
b. 甙類的層析分離往往決定于甙元的性質,如皂甙、強心甙,一般可用分配層析或硅膠吸附層析。  
c. 芳香油、甾體、萜類(結合成甙除外)包括萜類內酯,往往**氧化鋁及硅膠層析,若在氧化鋁柱上有次級反應,則宜用硅膠吸附層析。   
d. 黃酮體、單寧等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附層析。    
e. 有機酸、氨基酸一般可選用離子交換層析,有時也用分配層析,有些氨基酸也可用活性炭吸附層析。 
f. 多肽、多糖等大分子化合物,常用凝膠層析、親和層析、反相硅膠(鍵合硅膠)。 
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